猪圆环病毒病(PCVD)是指由猪圆环病毒2型(PCV2)所引起的断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)、皮炎肾炎综合症(PDNS)、繁殖系统障碍、增生性坏死性肺炎(PNP)、猪呼吸道疾病综合症(PRDC)、母猪流产及死亡综合症、先天性振颤(CT)及神经症状。最重要的猪圆环病毒疾病是PMWS。
猪圆环病毒病是公认的免疫抑制病之一,造成猪场损失惨重,疫苗免疫是唯一选择。从年猪圆环疫苗上市至今,已有20多家圆环产品先后上市,面对玲琅满目的产品,如何选择疫苗成了养殖场一个重要的课题,针对这些烦恼,本文希望能够为养殖场选择疫苗带来帮助,避免走弯路。
一.疫苗研究进展
目前对PCV-2疫苗的研究主要是从灭活疫苗、构建嵌合病毒、亚单位疫苗、重组腺病毒基因工程疫苗以及核酸疫苗等方面进行研究。现在取得新兽药证书的有20家,其中包括外企4家,但在中国注册仅有1家为勃林格。国内企业有文号的有10家马上上市的也有10家。合法上市的17家圆环疫苗不包括通过其它渠道进入中国市场的梅里亚、英特威/先灵葆雅、富道/硕腾3家及易邦的中试产品。这21家圆环病毒疫苗产品表现以下特点:
二.按生产方式可分:基因工程疫苗和全病毒灭活疫苗
1基因工程疫苗:
由于圆环病毒毒力弱,全病毒培养获得高滴度病毒难度大,部分企业采用原核表达和真核表达的方式,通过蛋白纯化浓缩提高抗原水平。真核表达对工艺要求是远大于原核表达系统,这和国外企业相比还是有一定差距的。
2全病毒灭活疫苗的区别
2.1生产工艺
由于原核表达与真核表达成本高,而且表达产量有限,对于蛋白纯化要求较高,制约了产品的市场推广。所以更多的是采用全病毒灭活的方式研究疫苗,梅里亚是最早投放市场的全病毒灭活疫苗,但梅里亚圆环疫苗没有在中国注册。关于全病毒灭活疫苗最大的瓶颈在于如何获得高滴度病毒液,所以必须优化工艺,提高滴度,目前,生物制品厂家多采用微载体悬浮培养的方式来获得高滴度病毒,这就能克服圆环病毒毒力弱带来活力不强的难题。
2.2毒株
目前市场上主要还是全病毒灭活疫苗,主要毒株SH株、LG株、DBNSX07株、WH株、ZJ/c株之分,但从本质上讲,是没有区别的,因为圆环病毒具有致病性的只有圆环2型,而且只有1个血清型,这5个毒株均属于PCV-2b,毒株只能表明分离地点以及天然免疫原性而已,运用MEGA4.0进行与疫苗毒株序列进行比对,我们清晰的发现:ZJ/C株、WH株处于同一分支;LG株、SH株处于同一分支;DBN-SX07株与LG株、SH株遗传距离更近,这个也与毒株分离早晚有一定关系,LG株、SH株疫苗年上市、DBN-SX07株疫苗年上市、ZJ/C株、WH株年上市,但这5个毒株均处于1个大分支,这也说明他们之间的遗传距离比较近,所以对于圆环病毒疫苗来讲,依据毒株选择疫苗没有多大实际意义,市场上宣传毒株只是炒作的虚头,关键还是要看病毒含量的高度。
2.3病毒含量
关于病毒含量,养殖场(户)老板以及技术人员一般对于此项技术参数理解较差,因为病毒含量的表示通常比较抽象,但此项技术指标也是最重要的参数,因此,这里提示各位养殖同仁注意。疫苗的免疫效果与病毒含量成正比,提高疫苗效果最好的方式之一就是增加抗原滴度。目前市场上的疫苗上市时间早晚不一,毒株各异,病毒含量差别也比较大,早期上市的产品病毒含量比较低,但最近上市的无论ZJ/c还是WH株病毒含量都达到.0TCID50以上,病毒含量最高的产品甚至是最低产品的63倍。对比各个毒株病毒含量ZJ/c株>WH株>SH株>LG株=DBN-SX07株。用另一种直观表示方式:ZJ/c株1头份=2头份WH株=20头份SH株=63头份LG株/DBN-SX07株。
2.4佐剂
目前猪圆环病毒疫苗所用佐剂主要有水包油(O/W)、油包水(W/O)、水包油包水(W/O/W)3种剂型,水包油(O/W)佐剂:又称为水质佐剂,和水的吸收性差不多,特点是比较稀。油包水(W/O):又称为油类佐剂,特点缓释作用比较强。水包油包水(W/O/W):又称为双相佐剂,特点介于水包油(O/W)、油包水(W/O)之间。
但目前生物制品厂家基本都宣传自家的好,由于圆环病毒毒力较弱,免疫原性较差,而且病毒很难获得高滴度培养,所以在佐剂的选择就显得非常重要,无论是哪种佐剂,都具备增大抗原颗粒,提高免疫原性,缓释作用,持续刺激,延长保护期的作用。所以佐剂的选择也必须考虑到吸收性与缓释性的平衡所以这个只是厂家宣传显示与众不同的着眼点而已。作为养殖户选择疫苗注意观察两个指标:通针性和保护期,这两个指标就是指佐剂吸收好、缓释强。
2.5灭活剂
猪圆环病毒是公认的免疫抑制的重要病原,尽管毒力相对较弱,但风险很高,目前基本都是灭活疫苗。灭活疫苗就牵扯到灭活剂的问题,使用灭活剂就要考虑有无残留的问题,如果存在残留,就会出现易致癌性、过敏反应几率高、疫苗反应重等缺点。
目前的灭活剂主要有:甲醛、BEI(二乙烯亚胺)、BPL(β-丙酰内酯)三种,甲醛最大优势价格便宜,灭活彻底,缺点是易造成残留,而且灭活会损伤病毒的糖蛋白,造成免疫原性下降,BEI和BPL,不易残留,不损伤糖蛋白,不影响免疫原性,但存在不易保存、价格昂贵的缺点。目前,灭活剂的发展趋势就是使用无残留的方法发展,国外大部分产品基本转上BEI、BPL灭活剂。
2.6圆环病毒灭活疫苗和基因重组Cap蛋白亚单位疫苗的比较
猪圆环病毒2型重组杆状病毒亚单位灭活疫苗,是应用分子生物学技术将猪圆环病毒2型Cap基因重组于杆状病毒内,在昆虫细胞上培养表达PCV2-rCap蛋白而制成的亚单位疫苗。该疫苗与市场使用的猪圆环病毒2型全病毒灭活疫苗相比,具有极其显著的特点:1、以当前的优势基因型毒株PCV2b基因序列做参考,经杆状病毒系统表达出类似病毒样颗粒(VLPs)的蛋白,抗原的表达量较高。能高效诱导机体产生良好的体液免疫与细胞免疫。2、具有良好的安全性,接种后不会发生急性、持续或潜伏感染。3、疫苗不受母源抗体的影响,免疫14天后,抗体水平就显著升高,免疫28天后,抗体转阳率为%。能够抵抗病毒感染,可有效降低猪体带毒和排毒。未免或免疫失败猪群,发病早起可以紧急接种,每头2ml。
金宇集团全资子公司扬州优邦、青岛易帮、辽宁益康等公司获得猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗(CP08株)的《兽药产品批准文号批件》。扬州优邦采用领先的重组杆状病毒——昆虫细胞(Sf9)基因工程表达技术和悬浮培养工艺,是国内首创的基因工程真核表达亚单位疫苗(勃林格也采用),处于国际领先地位,填补了国内同类空白,并成为替代国外同类产品的新选择。在国内苗价格低、效果不佳而进口苗价格高、效果好的背景之下,扬州优邦推出价格较进口苗便宜一半而效果接近国外的产品将会是业内圆环疫苗的突破。
三、疫苗的正确选择与使用
1、首免日龄
目前首免日龄主要有2周龄、3周龄、4周龄,还有免疫母猪等首免方式,由于圆环病毒最大的危害主要表现在保育猪上,也就是说早免疫,对于圆环的防控有很大的帮助。首免日龄越早,但猪日龄越小,免疫器官免疫功能低下,效果就越差,同时,由于猪日龄小,对外源病原的刺激就越敏感,造成过敏反应、疫苗应激就大很多。因此,疫苗免疫日龄对疫苗质量有着更高的要求。高质量疫苗本身必须具备三个条件:病毒含量高、疫苗纯度高、疫苗粘度小。但由于目前圆环病毒疫苗供大于求,由于竞争的关系,为了更突出自己的产品优势,有一些企业,疫苗说明写3周,却建议2周龄免的这种现象的出现,就是出于这个原因。总之,圆环疫苗的首免日龄早与疫苗质量呈正相关。
2、猪圆环疫苗的首免日龄与免疫次数
对于同一个产品,通常免疫次数越多,免疫效果就越好,1次免疫之后,抗体水平会逐渐上升,到达高峰之后,抗体滴度会随着时间的延长而下降,但当抗体滴度处于保护临界值附近,需要进行2次强化免疫,由于第1次免疫之后,会产生大量的Tm细胞(记忆性T细胞),能诱导产生大量的圆环病毒抗体的细胞克隆,通过第2次强化免疫,会激活Tm细胞功能,诱导大量的圆环病毒抗体的细胞克隆产生圆环病毒抗体,从而引起抗体水平比首免有更高的抗体高度。但免疫次数多,养殖场的劳动强度就大,成本就高,免疫1次成为了生物制品厂家与养殖场的追求。但如果免疫1次,那疫苗必须具备2个条件:高抗原含量、高缓释能力;这样就能够把保护性抗体持续到4月以上,育肥猪通常养殖周期在5个半月至6个月,而猪圆环病毒主要危害保育猪(一般为1月龄-2个月龄),正好在发病高峰期,圆环病毒的抗体水平处于高峰,所以会对猪圆环病毒有很好的保护作用。
目前市场上,免疫1次:勃林格、富道、ZJ/c株、WH株;免疫2次:英特威/先灵葆雅、梅里亚、LG株、SH株、DNB-SX07株。但由于圆环疫苗价格较贵、加上圆环病毒单纯发生的较少,也就是说免疫效果难以用肉眼评估,一些本来需要免疫两次的产品(主要病毒含量低)在宣传上忽悠养殖户免疫1次,主要目的让养殖场免疫1次,成本低,接受程度更容易,但是由于产品抗原含量低,抗体水平不高,维持时间较短,造成使用效果不明显,这个也是为什么有些猪场反映免疫猪圆环病毒疫苗没有效果的根本原因。当然,免疫1次,这个是圆环疫苗的发展方向,目前已成为现实,近期上市的国产猪圆环病毒疫苗ZJ/c株、WH株都是免疫1次(病毒含量.0TCID50以上)。所以,疫苗的免疫次数与病毒含量有很大关系,选择圆环灭活疫苗一定要学会看病毒含量。
3、免疫保护期与产生保护时间
由于圆环病毒颗粒较小、毒力较弱、免疫到产生完全保护的时间较长、免疫保护持续期较短,目前上市的产品免疫保护持续期为3-4个月,免疫后产生免疫保护的时间为21-35天。虽然,现在上市的毒株很多,但结果有较大差异,主要还是因为各个厂家的病毒含量有差异造成的,我们看到病毒含量高的产品,不但免疫次数少(免疫1次),而且免疫保护期反而长(达到4个月),从这个角度也说明了,提高圆环病毒疫苗的病毒含量的重要性。
猪圆环疫苗免疫保护期与产生保护时间表
毒株
产生免疫保护时间
免疫期
生产厂家
ZJ/c株
21
4个月
山东齐鲁、天津瑞普、四川华派、诺倍威、杭州荐量
LG株
28
3
哈维科、海利
SH株
35
3
南农高科、洛阳普莱克、乾元浩、吉林正业
DNB-SX07株
35
4
福州大北农、成都天邦、湖南中岸
WH株
28
4
武汉科前、中博、中牧、永顺、南京天邦
基因工程亚单位苗
14-21
4-5
普莱克(新)、青岛易帮、辽宁益康
Cp08株
21-28
4
勃林格、武汉中博、扬州伏帮
Yz株
21
4
金宇保灵
基因工程重组苗
21
4
新疆天康
综上所述:我们明确了目前中国圆环病毒的流行毒株为PCV-2b基因型,现有的疫苗也均采用与PCV-2b同源的毒株。同时我们也明确了其他影响疫苗质量的重要因素:生产工艺、病毒含量、佐剂、灭活剂等,由于猪圆环病毒只有1个血清型,所以毒株不是选择疫苗的主要依据,更多的要考虑的是生产工艺(基因重组苗)、病毒含量、佐剂、灭活剂等要素。通过总结我们也得知猪圆环病毒疫苗1针免疫是有条件的:病毒含量高;疫苗纯度高;疫苗粘度小。因此养殖场在选择疫苗的时候要自主选择疫苗的知识储备。
圆环疫苗参考表:
毒株
生产厂家
商品名
佐剂
毒株含量
免疫日龄次数
免疫期
ZJ/C
四川华派
圆环康
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
诺倍威
圆净诺
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
天津瑞普
诸元妥
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
山东齐鲁
圆捷
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
杭州荐量
圆量
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
WH株
武汉中博
圆环力康
油佐剂
.3TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
南京天邦
圆必宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
武汉科前
科圆宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
中牧
圆满
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
广东永顺
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
SH株
南农高科
圆克清
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
吉林正业
圆环易好
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
乾元浩
圆浩佳
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
普莱克
圆健
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
LG株
上海海利
圆毕净
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
LG株
哈维科
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
大北农
诸欢泰
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
成都天邦
圆力佳
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
湖南中岸
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
基因工程苗
青岛易帮
易圆净
双相
2周玲、1次
4个月
FLEX
勃林格
水佐剂
3周玲、1次
4个月
梅里亚
油佐剂
母猪配种前2周
4个月
圆环疫苗参考表:
毒株
生产厂家
商品名
佐剂
毒株含量
免疫日龄次数
免疫期
ZJ/C
四川华派
圆环康
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
诺倍威
圆净诺
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
天津瑞普
诸元妥
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
山东齐鲁
圆捷
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
杭州荐量
圆量
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
WH株
武汉中博
圆环力康
油佐剂
.3TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
南京天邦
圆必宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
武汉科前
科圆宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
中牧
圆满
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
广东永顺
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
SH株
南农高科
圆克清
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
吉林正业
圆环易好
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
乾元浩
圆浩佳
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
普莱克
圆健
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
LG株
上海海利
圆毕净
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
LG株
哈维科
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
大北农
诸欢泰
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
成都天邦
圆力佳
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
湖南中岸
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
基因工程苗
青岛易帮
易圆净
双相
2周玲、1次
4个月
FLEX
勃林格
水佐剂
3周玲、1次
4个月
梅里亚
油佐剂
母猪配种前2周
4个月
圆环疫苗参考表:
毒株
生产厂家
商品名
佐剂
毒株含量
免疫日龄次数
免疫期
ZJ/C
四川华派
圆环康
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
诺倍威
圆净诺
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
天津瑞普
诸元妥
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
山东齐鲁
圆捷
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
杭州荐量
圆量
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
WH株
武汉中博
圆环力康
油佐剂
.3TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
南京天邦
圆必宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
武汉科前
科圆宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
中牧
圆满
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
广东永顺
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
SH株
南农高科
圆克清
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
吉林正业
圆环易好
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
乾元浩
圆浩佳
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
普莱克
圆健
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
LG株
上海海利
圆毕净
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
LG株
哈维科
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
大北农
诸欢泰
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
成都天邦
圆力佳
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
湖南中岸
油佐剂
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2周玲、2次
3个月
基因工程苗
青岛易帮
易圆净
双相
2周玲、1次
4个月
FLEX
勃林格
水佐剂
3周玲、1次
4个月
梅里亚
油佐剂
母猪配种前2周
4个月
圆环疫苗参考表:
毒株
生产厂家
商品名
佐剂
毒株含量
免疫日龄次数
免疫期
ZJ/C
四川华派
圆环康
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
诺倍威
圆净诺
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
天津瑞普
诸元妥
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
山东齐鲁
圆捷
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
ZJ/C
杭州荐量
圆量
水佐剂
.3TCID50
2周玲、1次
4个月
WH株
武汉中博
圆环力康
油佐剂
.3TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
南京天邦
圆必宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
武汉科前
科圆宁
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
中牧
圆满
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
WH株
广东永顺
油佐剂
.0TCID50
3周玲、1次
4个月
SH株
南农高科
圆克清
双相
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2周玲、2次
3个月
SH株
吉林正业
圆环易好
双相
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2周玲、2次
3个月
SH株
乾元浩
圆浩佳
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
SH株
普莱克
圆健
双相
.0TCID50
2周玲、2次
3个月
LG株
上海海利
圆毕净
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
LG株
哈维科
水佐剂
.5TCID50
4周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
大北农
诸欢泰
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
成都天邦
圆力佳
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
DBN-SX07株
湖南中岸
油佐剂
.5TCID50
2周玲、2次
3个月
基因工程苗
青岛易帮
易圆净
双相
2周玲、1次
4个月
FLEX
勃林格
水佐剂
3周玲、1次
4个月
梅里亚
油佐剂
母猪配种前2周
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