第一节血清IgG、IgA、IgM测定 第二节血清IgD和IgE测定 第三节尿液及脑脊液Ig测定 第四节血清IgG亚类测定及临床意义 第五节M蛋白测定及临床意义 第六节轻链测定及临床意义 第七节冷球蛋白的检测 免疫球蛋白（Ig）是由浆细胞合成和分泌的一组具有抗体活性的蛋白质，按其重链性质共分IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类。IgG有4个亚型（IgGl、IgG2、IgG3、IgG4）。IgA除有IgA1和IgA2两个亚型外，尚有分泌型IgA（sIgA），它们的单体结构基本相同。IgM也有2个亚型IgM1和IgM2。
第一节 血清IgG、IgA、IgM测定
IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，其中以IgG1含量最多。IgG是血液和细胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫应答的主要抗体。大多数抗感染抗体与自身抗体都为IgG类。IgA可分为血清型和分泌型两类。血清型IgA主要以单体形式存在。分泌型IgA由J链连接的二聚体和分泌成分组成，是参与黏膜局部免疫的主要抗体。主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中。IgM为五聚体，是分子量最大的免疫球蛋白，又称巨球蛋白。主要存在于血液中，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体。抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体。 血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。一、血清IgG、IgA、lgM测定 （一）单向环状免疫扩散法 该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。 （二）免疫比浊法 该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义 （一）年龄新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。 （二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高 慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。 （三）单一免疫球蛋白升高 主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。 （四）免疫球蛋白降低 先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。
第二节 血清IgD和IgE测定
正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。一、IgD测定及临床意义 （一）测定方法IgD的测定方法有放射免疫分析法、乳胶颗粒免疫比浊分析法、酶联免疫吸附试验。在临床用得最多的是酶联免疫吸附试验测定IgD。 （二）临床意义 血清中IgD升高主要见于妊娠末期、IgD型骨髓瘤、甲状腺炎和大量吸烟者。IgD降低见于原发性无丙种球蛋白血症、肺硅沉着病（矽肺）、细胞毒药物治疗后。二、IgE测定及临床意义 （一）测定方法1.总IgE的测定方法有化学发光免疫分析法、放射免疫分析法、乳胶颗粒免疫比浊法及酶联免疫吸附试验等。在临床上用化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附试验测定总IgE较为常见。2.特异性IgE的检测方法 主要有免疫斑点法和酶联免疫吸附试验。商品化的试剂盒提供了多种特异性的变应原，包括食物、吸入以及药物过敏原，利用这些特异性变应原就可以检测到血清中特异性IgE抗体。 （二）临床意义1.I型变态反应性疾病，如特发性哮喘、特发性皮炎、过敏性鼻炎等IgE常升高。2.非变态反应性疾病，如IgE骨髓瘤、寄生虫感染等IgE升高。3.急性或慢性肝炎、SLE、类风湿关节炎等疾病IgE可升高。4.IgE降低见于原发性无丙种球蛋白血症、肿瘤及化疗药物应用后。
第三节 尿液及脑脊液Ig测定
一、尿液Ig测定及临床意义 正常人尿液中的Ig含量甚微。在滤过膜损伤轻微时，尿液中以IgG滤出增多为主。当滤过膜损伤严重时，尿液中除IgG滤出外，分子量较大的IgM也开始滤出。 临床上常选用测定尿液和血液中的转铁蛋白（TRF）及IgG含量，计算选择性蛋白尿指数（SPI），以此来评估肾小球滤过膜破坏程度及观察治疗效果和预后。 选择性蛋白尿指数计算公式为：SPI=（尿IgG／血清IgG）／（尿TRF／血清TRF）。SPI≤0.1表明肾脏有高度选择性地排泌分子量较小的蛋白质。SPI≥0.2表明肾脏是非选择性地排泌分子量较大的蛋白质。 微小病变型肾病的SPI大部分属于高度选择性（SPI≤0.1）。 膜性肾病、膜增殖性肾炎与肾病综合征其SPI通常≥0.2。 尿内IgA在原发性肾小球肾病和慢性肾炎肾病时含量最高，在慢性肾炎高血压型及普通型可轻度增高，而在隐匿性肾炎及急性肾炎时含量很少。尿内IgG在原发性肾小球肾炎和慢性肾炎时含量较高，其他类型肾小球疾病时仅轻度增高。尿内IgM仅出现在慢性肾炎，而原发性肾小球肾炎和隐匿性肾炎时含量甚微。二、脑脊液Ig测定及临床意义IgG、IgA、IgM在CSF中的浓度依次递减。 临床上主要通过测定白蛋白商值（Albquotient,QALB）,即测定CSF中白蛋白（AlbCSF）和血清白蛋白（AlbS）比值来反映血脑屏障受损程度，其计算公式为。 白蛋白商值=[AlbCSF/AlbS×]。 当商值＜9时，提示血脑屏障无明显受损，9～15为轻度受损；15～33为中度受损；33～为重度受损；＞为完全破裂。QALB轻度升高，常见于急慢性病毒感染、多发性硬化、神经病毒、带状疱疹性神经节炎、脑萎缩等神经系统疾病。QALB中度升高，常见于急性神经疏螺旋体病、条件致病性脑膜炎、吉兰-巴雷综合征等。QALB重度升高，常见于化脓性脑膜炎、单纯性疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等严重细菌感染性疾病。 脑脊液IgG测定方法采用速率散射免疫比浊法，脑脊液采集后应离心再行测定。IgG生成指数和24小时IgG合成率升高，多见于多发性硬化症。化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎时IgG、IgA均增高。脑血管疾病如脑血栓、蛛网膜下腔出血时，IgG明显升高。SLE脑病、神经梅毒、重症肌无力等IgG明显升高。精神分裂症IgG和IgM升高明显。神经系统肿瘤时，以IgA和IgM升高为主。
第四节 血清IgG亚类测定及临床意义
IgG有4个亚类，即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，正常人体血中含量依次减少，IgG1最多，IgG4最少。测定Ig亚类的方法有放射免疫法、酶联免疫吸附试验、单向免疫扩散法、速率散射免疫比浊法等，其测定原理已在有关章节介绍。临床常选用操作简单、成本低廉的酶联免疫吸附试验进行测定。1.IgG亚类的含量随年龄的不同而变化。当某一IgG亚类含量低于年龄对应的参考范围时，就称为IgC亚类缺陷。2.临床上IgG亚类缺陷可表现为反复呼吸道感染、腹泻、中耳炎、鼻窦炎、支气管扩张以及哮喘。3.IgA缺乏症常伴有IgG2缺陷，某些病毒感染IgG1、IgG2、IgG3下降显著。4.IgG亚类异常增高主要见于Ⅰ型变态反应，如变应原可刺激机体使IgG4含量增加。 微小病变型肾病的SPI大部分属于高度选择性（SPI≤0.1）。 膜性肾病、膜增殖性肾炎与肾病综合征其SPI通常≥0.2。
第五节 M蛋白测定及临床意义
M蛋白（MP）是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白。 临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。 （一）血清蛋白区带电泳技术检测M蛋白 血清蛋白区带电泳技术是检测蛋白质的经典分析方法。该法应用方便，费时短，是筛选M蛋白的最基本方法。单克隆免疫球蛋白增殖（M蛋白血症）的患者，在蛋白区带电泳中出现狭窄而浓集的蛋白区带，即M蛋白带。 （二）血清免疫球蛋白定量测定 血清免疫球蛋白定量测定可作为检测M蛋白的粗筛试验。免疫球蛋白定量测定常用的方法有单向琼脂免疫扩散法和免疫比浊法。恶性单克隆丙种球蛋白血症血清中常表现出某一类丙种球蛋白显著增高，大多在30g／L以上。 （三）免疫电泳 免疫电泳（IEP）是区带电泳技术和免疫扩散技术相结合的一种免疫学分析方法。 （四）免疫固定电泳 免疫固定电泳（IFE）技术是区带电泳技术与特异性抗血清的免疫沉淀反应相结合的一种免疫学分析方法。是临床鉴定M蛋白最常用的方法。免疫固定电泳结合了蛋白质电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异性，它在许多实验室已经取代了传统的免疫电泳技术，成为单克隆抗体定性和分型鉴定的首选方法。该方法测定时间短，整个操作过程仅需1.5～2小时；敏感性高，能检测到0.51～1.5g／L含量的单克隆蛋白；结果直观，易于分析和判定。
第六节 轻链测定及临床意义
（一）本-周（Bencejones）蛋白测定本-周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链。 检测方法常用化学法（加热沉淀法）和免疫法两种。检测本-周蛋白对轻链病的诊断是必不可少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助。 轻链病患者尿中可测得本-周蛋白，但血中反而呈阴性，其原因是本-周蛋白分子量小，极易迅速自。肾脏排出，血中含量并不升高，检测时应当注意。同时，在某些情况下血中轻链发生聚合，不易从肾脏排出，尿液轻链测定阴性。 （二）κ-Ig和λ-Ig定量测定 定量检测κ-Ig和λ-Ig两种轻链片段的方法主要有单向免疫扩散法和免疫比浊法。 免疫比浊法因有专门设备，检出的结果更加准确，测定时间更加快速，而取代了单向免疫扩散法。 非分泌型骨髓瘤患者不能检出单克隆丙种球蛋白的M区带，血清中丙种球蛋白的含量大大降低，但骨髓中却存在大量的浆细胞。为明确诊断需对患者作骨髓穿刺，进行细胞形态学检查和细胞免疫表型分析。
第七节 冷球蛋白的检测
冷球蛋白又称冷免疫球蛋白，是一组在低温下发生沉淀，加温后又复溶的免疫球蛋白。冷球蛋白一般在-4℃时发生沉淀，于37℃时又复溶解。 根据冷球蛋白的免疫化学组成，可分为三种类型：Ⅰ型：为单克隆冷球蛋白型，占25%～40%，由一种免疫球蛋白组成，即由单一克隆的淋巴细胞合成的免疫球蛋白重链和（或）拯链构成，最常见为IgM或IgG。此型冷球蛋白在血中浓度较高，多见于免疫增生性疾病，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、重链病等。Ⅱ型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占15%～25%，系由两类不同的免疫球蛋白组成。其中一类是单克隆的抗体，多为IgM）多克隆抗体多为IgG，两者结合组成免疫复合物。最常见的组合为IgM-IgG。这种混合性冷球蛋白多见于自身免疫性疾病，如类风湿关节炎、干燥综合征和原发性混合性冷球蛋白血症等。Ⅲ型：多克隆混合型冷球蛋白，约占50%，由两类或两类以上的多克隆免疫球蛋白组成，即抗原和抗体都是多克隆的。最常见的组合为IgM-IgG。该型冷球蛋白在血中浓度较低，亦多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、链球菌感染后肾小球肾炎、感染性心内膜炎。 由于冷球蛋白遇冷即可产生冷沉淀，因此，正确的采血是冷球蛋白检测的关键，宜在体温条件下采集和保存静脉血。
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