年-年猪瘟流行病学调查
钟植文，陈珊，何柳芬，黄婷婷，杨傲冰（广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州 ）摘要
为了调查和研究猪瘟流行情况，试验采用ELISA和RT-PCR方法对年-年来自全国各地送检的样品进行抗体和病原检测，并对猪瘟流行野毒株E2基因进行序列测定和分析。结果表明：年全国各地送检的个猪场共份猪血清样品中检测到猪瘟抗体阳性份，抗体样品阳性率为86.7%；而在来自全国各地的个猪场共份病料样品当中，检测到猪瘟病原阳性共19个场37份病原，即猪瘟病原样品阳性率7%。年全国各地送检的个猪场共份猪血清样品中检测到猪瘟抗体阳性份，抗体样品阳性率为90.5%；而在来自全国各地的50个猪场共份病料样品当中，检测到猪瘟病原阳性共3个场5份病原，即猪瘟病原样品阳性率4.3%。基因序列测定和分析显示，年-年的猪瘟野毒株均属于基因2.1型。检测结果说明不少猪场的猪瘟免疫做得比较到位，但仍然有些猪场在猪瘟防疫方面存在不足，猪瘟野毒依然在猪场里面存在，实在不容忽视。
关键词
猪瘟病毒；E2基因；抗体
前言
猪瘟（classicalswinefever，CSF）是由猪瘟病毒（Classicalswinefevervirus，CSFV）引起的以高热稽留、毛细血管变性、全身出血、坏死和梗死为主要特征的传染病[1]。猪瘟给养猪业造成巨大的经济损失，世界动物卫生组织（OIE）将其列为通报性动物疫病，我国也将其列为一类疫病[2]。
CSFV与牛病毒性腹泻病毒（Bovineviraldiarrheavirus，BVDV）和绵羊边界病毒（Borderdiseasevirus，BDV）同属于黄病毒科瘟病毒属。CSFV为单股正链RNA病毒，基因组大小约为12kb，编码多种蛋白，其中E2蛋白是主要保护性抗原，可诱导机体产生中和抗体，但E2基因变异很大[3]。因此，常常针对E2蛋白检测抗体来评估保护力水平，又针对E2基因进行序列测定和分析以调查CSFV遗传变异情况。本试验就年-年全国各地送检的样品采用ELISA和RT-PCR方法进行抗体和病原检测，以调查猪瘟流行情况。01
材料与方法
1.1样品
年-年全国各地送检的血清和病料等样品由本实验室收取和保存。1.2主要试剂IDEXXCSFVAbELISA试剂盒，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。MiniBESTViralRNAExtractionKit、PrimeScriptTMⅡ1stStrandcDNASynthesisKit、PremixTaq?（ExTaq?Version2.0plusdye）、DL2,DNAMarker、TakaraMiniBESTAgaroseGelDNAExtractionKit.4.0，购自宝生物工程（大连）有限公司（大连TaKaRa公司）。1.3抗体检测猪瘟血清抗体检测采用IDEXXCSFVAbELISA试剂盒，并严格按照CSFVAb-06--04爱德士猪瘟病毒抗体检测试剂盒中文说明书进行操作。1.4病原检测1.4.1引物的设计与合成参考GB/T-猪瘟诊断技术和GB/T-猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法等，从GenBank上获取多株CSFV的E2基因序列，序列经DNAStar（Verison4.0）分析比较后，使用和PrimerPremier（Verison5.0）针对E2基因的保守区域设计特异性引物，所设计引物送往英潍捷基（上海）贸易有限公司合成。引物序列如下[4]：E21：TAACTGGGGCACAAGGCAE22：TTAAGTTCCCTATCAACAC1.4.2RT-PCR反应将送检的病料等样品进行研磨处理后离心，取上清液进行核酸抽提，用TakaraMiniBESTViralRNAExtractionKit提取病料等样品的病毒总RNA。以RandomPrimer和Oligo(dT)为反转录引物，用PrimeScriptTMⅡ1stStrandcDNASynthesisKit合成cDNA。再用针对猪瘟病毒E2基因所设计的特异性引物和PremixTaq?（ExTaq?Version2.0plusdye）进行PCR扩增检测，将RT-PCR扩增产物电泳检测结果。1.4.3序列测定和分析扩增产物经TakaraMiniBESTAgaroseGelDNAExtractionKit.4.0回收纯化后送英潍捷基（上海）贸易有限公司进行序列测定，将测得的序列提交NCBIBLASTSERVER进行联机检索。从GenBank上获得疫苗毒C株、强毒石门株（Shimen株）以及近年来流行的基因2型和基因3型野毒株的E2基因核苷酸序列，结合本试验样品的相应序列，利用DNAStar软件包中的MegAlign程序中ClustalW方法进行相似性比较，并利用MEGA6软件绘制系统进化树。CSFV参考毒株信息见表1。02
结果与分析
2.1抗体检测年1月-12月份，对全国个猪场共份猪血清样品进行猪瘟抗体检测，其中猪瘟抗体阳性份，样品阳性率为86.7%。具体每个月检测猪瘟抗体的猪场数量、样品数量、阳性样品数量和样品阳性率见表2和图1。年1月-12月份，对全国个猪场共份猪血清样品进行猪瘟抗体检测，其中猪瘟抗体阳性份，样品阳性率为90.5%。具体每个月检测猪瘟抗体的猪场数量、样品数量、阳性样品数量和样品阳性率见表3和图2。年1月-12月份，对全国个猪场进行猪瘟抗体检测，其中猪瘟抗体阳性的猪场数量为，占比为98.7%。另外，猪瘟抗体样品阳性率90%及以上的猪场数量为，占比为52%；猪瘟抗体样品阳性率80%以下的猪场数量为，占比为26%。具体每个月检测的猪场数量、不同样品阳性率的猪场数量及其占比见表4和图3。年1月-12月份，对全国个猪场进行猪瘟抗体检测，其中猪瘟抗体阳性的猪场数量为，占比为99.2%。另外，猪瘟抗体样品阳性率90%及以上的猪场数量为80，占比为64%；猪瘟抗体样品阳性率80%以下的猪场数量为28，占比为22%。具体每个月检测的猪场数量、不同样品阳性率的猪场数量及其占比见表5和图4。2.2病原检测年1月-12月份，对全国个猪场共份样品进行猪瘟病原检测，其中猪瘟病原阳性有19个猪场共37份样品，即猪瘟病原样品阳性率为7%，猪瘟病原阳性猪场占比为11%。具体每个月检测猪瘟病原的猪场数量、猪瘟病原阳性猪场数量及其占比、样品数量、阳性样品数量和样品阳性率见表6和图5。年1月-12月份，对全国50个猪场共份样品进行猪瘟病原检测，其中猪瘟病原阳性有3个猪场共5份样品，即猪瘟病原样品阳性率为4.3%，猪瘟病原阳性猪场占比为6%。具体每个月检测猪瘟病原的猪场数量、猪瘟病原阳性猪场数量及其占比、样品数量、阳性样品数量和样品阳性率见表7和图6。将年和年的猪瘟病原阳性样品进行送样测序，成功获得相应的基因序列后应用DNAStar软件进行分析和比较，并利用MEGA6软件绘制系统进化树。基于E2基因部分序列绘制的进化树，该基因分型结果显示：小部分毒株和疫苗毒C株很接近，处于同一小分支，和强毒石门株（Shimen株）一同属于基因1型，推测这部分毒株是疫苗毒株；而大部分毒株，和2.1a、2.1b、2.1c、2.1d等基因2.1型流行野毒株接近，处于同一分支中，显示当前流行的野毒株都属于基因2.1型。03
讨论
3.1猪瘟抗体
目前，猪瘟活疫苗免疫已被公认为预防猪瘟非常重要的一环。基本上，每个养猪场每个养猪户都进行猪瘟活疫苗免疫，只是免疫程序有所不同而已。免疫猪瘟后，通过检测猪瘟抗体阳性率的高低来评价对猪瘟野毒的保护力，或者判断发生猪瘟风险的高低，都具有非常重要的参考意义。一般认为，猪瘟抗体阳性率90%及以上，表明猪场内猪瘟控制得相当好；而猪瘟抗体阳性率低于80%，则显示该猪场发生非典型性猪瘟的风险比较大。年，猪瘟抗体样品阳性率为86.7%，猪瘟抗体阳性的猪场占比为98.7%，猪瘟抗体样品阳性率90%及以上的猪场占比为52%，而80%以下的猪场占比为26%。而年，猪瘟抗体样品阳性率为90.5%，猪瘟抗体阳性的猪场占比为99.2%，猪瘟抗体样品阳性率90%及以上的猪场占比为64%，而80%以下的猪场占比为22%。对比年和年的检测结果，可见猪瘟抗体样品阳性率和猪瘟抗体阳性的猪场占比在上升，猪瘟防控做得好的猪场占比也在上升，而猪瘟防制存在较大漏洞的猪场占比在下降，显示猪场越来越重视猪瘟免疫，猪瘟防控工作做得越来越到位。3.2猪瘟病原年，猪瘟病原样品阳性率为7%，猪瘟病原阳性猪场占比为11%；年，猪瘟病原样品阳性率为4.3%，猪瘟病原阳性猪场占比为6%。从猪瘟病原检测结果来看，当前检测到猪瘟病原的比例较低，其中猪瘟野毒病原的比例更低，且年比年检测到的病原阳性比例低。病原检测结果反映出，当前猪瘟比较平稳，免疫防控措施比较到位，没有爆发和流行。另外，检测到猪瘟病原阳性，不一定就是猪瘟野毒，也有可能是猪瘟疫苗毒株，要通过基因测序和分型分析来区分疫苗毒株和野毒株比较好。从病原阳性样品的基因测序和分型分析结果来看，当前流行的野毒株和2.1a、2.1b、2.1c、2.1d等基因2.1型流行野毒株接近，基本都属于基因2.1型，建议当前要重点警惕基因2.1型流行野毒株。3.3猪瘟免疫防控结合和两年的猪瘟抗体和猪瘟病原检测结果来看，当前猪瘟抗体阳性率高，病原阳性率低，显示猪瘟当前整体平稳，没有爆发和流行，可见当前通过猪瘟疫苗免疫，提高猪瘟抗体水平，缩短免疫空档期，和加强隔离消毒等生物安全措施以降低野毒污染程度，对预防猪瘟仍然是相当有成效的方法。参考文献
［1］姚文生，范学政，王琴，等．国猪瘟流行现状与防控措施建议［J］．中国兽药杂志，，45(9):44－47．
［2］谭颖翌，毛燕，吴健敏，等．—年广西猪瘟流行监测及遗传变异分析［J］．中国兽医学报，，33(10):－．［3］BAUHOFEＲO，SUMMEＲFIELDA，SAKODAY，etal．ClassicalswinefevervirusNprointeractswithinterferonregulatoryfactor3andinducesitsproteasomaldegradation［J］．JVirol，，81(7):－．［4］王爱华，杜冬华，薛拥志，等．河北省猪瘟病毒分子流行病学调查［J］．黑龙江畜牧兽医，(07上):－．预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
